Безопасность изделий медицинского назначения в первую очередь обеспечивается токсикологическими испытаниями. Однако ряд изделий, применяемых в производстве инъекционных препаратов (реакторы, трубопроводы, фильтры, стеклянная и полимерная тара) и в клинике для проведения инъекций (шприцы, катетеры) должны быть апирогенными. Поэтому такого рода изделия подвергаются еще и испытанию на пирогенность, так как нередки случаи, когда именно они являются причиной загрязнения инъекционных растворов и, соответственно, возникновения пирогенной реакции у больных.
Как известно, основной причиной пирогенной реакции являются бактериальные эндотоксины (БЭ), наличие которых в настоящее время в основном определяют с помощью ЛАЛ-теста in vitro (ОФС 42-0002-00). Тем не менее на этапе разработки и внедрения в производство нового изделия должно быть установлено, что в его состав не входят вещества, способные вызывать пирогенную реакцию.
В настоящей работе были проведены испытания по показателям «Бактериальные эндотоксины» и «Пирогенность» серийных образцов фильтроэлементов в виде патронов с размером пор 0,45/0,2 мкм производства ООО НПП «Технофильтр» (г. Владимир), марки ЭПМ.К-045/020-Д-250М на основе полиамида и марки ЭПМ.ПС-045/020-Д-250М на основе полиэфирсульфона, отобранных методом случайной выборки.
Испытания по показателю «бактериальные эндотоксины»
Содержание бактериальных эндотоксинов (БЭ) в образцах воды и фильтратах после фильтроэлементов определяли in vitro с помощью ЛАЛ-теста (модификация гель-тромб тест) в соответствии с требованиями ОФС 42-0002-00. В работе использовали диагностический многокомпонентный набор фирмы «Associates of CAPE COD, Inc. ЛАЛ-реактив PYROTELL® c чувствительностью l = 0,03 ЕЭ/мл, контрольный стандарт эндотоксина (КСЭ, 0,5 мкг во флаконе), воду для ЛАЛ-теста.
Валидация процедуры проведения анализа
Валидация качества используемых реактивов и процедуры ЛАЛ-теста в модификации гель-тромб была проведена в соответствии с требованиями раздела ОФС 42-0002-00 «Подтверждение заявленной чувствительности ЛАЛ-реактива».
Результаты контрольного эксперимента показали, что чувствительность используемого ЛАЛ-реактива в условиях эксперимента соответствует величине, заявленной фирмой-производителем (Таблица 1).
Таблица 1
Подтверждение заявленной чувствительности ЛАЛ-реактива PYROTELL®
(lot # 505-12-379) l = 0,03 ЕЭ/мл (фирма «Associates of CAPE COD, Inc.»)
| Разведения КСЭ (lot # 106) на воде для ЛАЛ-теста |
Концентрация эндотоксина в конечной точке реакции |
Геометрическое среднее значений концентрации эндотоксина | Контроль отрицательный (Вода для ЛАЛ-теста) |
||||
| № ряда | 2l | l | 0,5l | 0,25l | |||
| 1 | + | + | — | — | 0,03 ЕЭ/мл | 0,03 ЕЭ/мл | — |
| 2 | + | + | — | — | 0,03 ЕЭ/мл | — | |
| 3 | + | + | — | — | 0,03 ЕЭ/мл | ||
| 4 | + | + | — | — | 0,03 ЕЭ/мл | ||
Обозначение конечного результата гель-тромб теста: + наличие геля, — отсутствие геля
Таким образом, процедуру проведения ЛАЛ-теста с помощью указанных реактивов считали валидированной, а данные реактивы пригодными к использованию для анализа представленных образцов воды.
Результаты и их обсуждение
Результаты определения содержания БЭ в образцах воды до подачи на фильтроэлемент и в полученных фильтратах, представлены в Таблице 2.
Испытание большинства фильтрующих элементов на содержание бактериальных эндотоксинов показало, что с их поверхности не смывается значимое количество БЭ, которое может быть обнаружено с помощью ЛАЛ-теста в модификации гель-тромб (Таблица 2). Уровень БЭ в воде до фильтрации практически не изменялся после ее пропускания через фильтр. Исключение составил фильтрующий элемент марки ЭПМ.ПС-045/020-Д-250М партия 3774, № 128202. После фильтрации через него первых 4-8 л воды были получены фильтраты с повышенным содержанием БЭ. Однако, если через фильтроэлементы данной марки предварительно пропустить дистиллированную воду в количестве не менее 10л, бактериальные эндотоксины не выделяются.
Определение содержания бактериальных эндотоксинов
в фильтрующих элементах ООО НПП «Технофильтр»
Таблица 2
| Наименование фильтрующего элемента | Проба № | Содержание БЭ в дистиллированной воде перед подачей на фильтр [ЕЭ/мл] | Количество отфильтрован-ной через фильтр воды [л] | Содержание БЭ в воде после фильтрования [ЕЭ/мл] |
| 1 | 3 | 4 | 5 | 6 |
| ЭПМ.К-045/020-Д-250М партия 3776, элемент № 128181 | 1 | 0,25 | 4 | 0,25 |
| 2 | 0,25 | 8 | 0,25 | |
| 3 | 0,25 | 12 | 0,25 | |
| 4 | 0,25 | 16 | 0,25 | |
| ЭПМ.ПС-045/020-Д-250М партия 3774, элемент № 128202 | 1 | 0,25 | 4 | Более 0,25 |
| 2 | 0,25 | 8 | Более 0,25 | |
| 3 | 0,125 | 12 | 0,125 | |
| 4 | 0,125 | 16 | 0,125 | |
| ЭПМ.ПС–045/020–Д-250М партия 3774, элемент № 128220 |
1 | 0,25 | 10 | 0,25 |
| ЭПМ.К–045/020-Д-250М партия 3776, элемент № 128091 | 1 | 0,25 | - | 0,25 |
| ЭПМ.К-045/020-Д-250М партия 3771, элемент № 128160 | 1 | 0,25 | - | 0,25 |
| ЭПМ.ПС-045/020-Д-250М партия 3774, элемент № 127734 | 1 | 0,25 | 10 | 0,25 |
Испытание по показателю «Пирогенность»
На этапе разработки и внедрения в производство нового изделия (фильтрующего элемента) необходимо установить, что в его состав не входят вещества, не являющиеся БЭ, но способные вызывать пирогенную реакцию. Задача экспериментов состояла в испытании фильтратов на пирогенность, которое проводили in vivo на кроликах в соответствии с методикой, изложенной в Государственной фармакопее XI (вып. 2, стр. 183).
Кролики были получены из питомника ГУ НЦБМТ РАМН филиал «Белый Мох». Животных содержали в виварии согласно санитарным правилам, на стандартном рационе вивария с использованием сухого гранулированного корма.
В эксперименте испытывали фильтраты, полученные после пропускания апирогенной дистиллированной воды через фильтроэлементы на основе полиамида марки ЭПМ.К-045/020-Д-250М и на основе полиэфирсульфона марки ЭПМ.ПС-045/020-Д-250М. Перед взятием пробы через фильтроэлемент ЭПМ.ПС-045/020-Д-250М было предварительно профильтровано 10 л дистиллированной воды.
Задача эксперимента состояла в подтверждении того, что в состав фильтрующих элементов не входят вещества, способные вызывать пирогенную реакцию.
Непосредственно перед испытанием в стерильных условиях на основе каждого из испытуемых фильтратов и апирогенной субстанции натрия хлорида готовили 0,9% раствор.
В эксперименте приготовленные растворы в дозе 10 мл/кг вводили животным внутривенно. После введения температуру тела у кроликов измеряли каждый час на протяжении 3 часов. Результаты испытания представлены в Таблице 3.
Испытание на пирогенность образцов воды (фильтратов), пропущенных через фильтрующие элементы ООО НПП «Технофильтр»
Таблица 3
| Опыт | Кролик | Температура тела животного при измерении | Максимальные изменения температуры | Сумма максимальных повышений температуры | |||||
| № п/п | Масса, кг | До введения раствора | После введения раствора через: | ||||||
| За 30 мин | 0 мин(исходная) | 1 час | 2 часа | 3 часа | |||||
| Образец воды, пропущенный через фильтроэлемент на основе полиамида марки ЭПМ.К-045/020-Д-250М | |||||||||
| 22.06.07 | 1 | 3,05 | 39,2 | 39,1 | 39,0 | 39,0 | 39,1 | - 0,1 | + 0,2 |
| 2 | 2,95 | 39,1 | 39,1 | 39,1 | 39,1 | 39,2 | + 0,1 | ||
| 3 | 2,85 | 39,2 | 39,2 | 39,1 | 39,1 | 39,3 | + 0,1 | ||
| Образец воды, пропущенный через фильтроэлемент на основе полиэфирсульфона марки ЭПМ.ПС-045/020-Д-250М | |||||||||
| 5.07.07 | 4 | 3,25 | 39,1 | 39,0 | 39,0 | 39,0 | 39,1 | - 0,1 | + 0,7 |
| 5 | 3,5 | 39,3 | 39,2 | 39,7 | 39,7 | 39,7 | + 0,5 | ||
| 6 | 3,5 | 39,1 | 39,1 | 39,1 | 39,2 | 39,3 | + 0,2 | ||
Как следует из таблицы, повышение температуры контрольных животных не превышает имеющийся норматив (1,4оС) и фильтраты после фильтроэлементов следует считать апирогенными.
Таким образом, показано, что серийные образцы фильтроэлементов марки ЭПМ.К-045/020-Д-250М, отобранные методом случайной выборки, апирогенны. Серийные образцы марки ЭПМ.ПС-045/020-Д-250М, отобранные методом случайной выборки апирогенны после фильтрования через них 10 л дистиллированной воды.